flag标签(我最喜欢的解释)
FLAG标记物是惟一专为标记目的设计的多肽标记物(Hoppetal.1988),其特点 是标记物的序列不是来自任何已知的蛋白。该标记物是由8个氨基酸残基组成的多肽,具有亲水性,可置于蛋白的氨基或羧基末端。有两种商品化的抗体MI和 M2,可识别FLAG标记物。Mi抗体的结合要求表位是氨基末端,因而仅适用于将标记物连接到蛋白的氨基末端。二价阳离子(最好为Ca2+)可增强MI抗 体与FLAG标记物的结合,因此金属螯合剂,如EDTA可引起其相互作用完全或部分破坏,可在很温和的条件下纯化。
M2抗体的存在使该系统显示出更大的应用价值,因为FLAG无论是处于蛋白分子中间或羧基末端,该抗体可识别相同的FLAG表位。M2对FLAG表位的识别不需要二价阳离子的存在,并且可以通过游离的多肽竞争性地将FLAG标记蛋白从M2分子中温和洗脱下来。
多种FLAG标记蛋白可保留全部的生化活性(如转录因子、生长因子和酶),这些标记物亦广泛应用于细胞染色、免疫印迹和免疫沉淀试验中。由于已有各种载体和检测试剂出售,包括抗体亲和树脂和直接标记抗体的商品,使其成为人们常选用的系统。
由于对抗-FLAG抗体的特异性进行了更详尽的研究,使得可以采用其他替代序列(Slootstraetal.1997)和更短部分(Knappik和 Pluckthunl994)作为标记物。抗-FLAG抗体产生的本底一般非常低,但M2抗体至少可与一种细胞蛋白发生交叉反应(Schafer和 Braunl995)。
M2抗体的存在使该系统显示出更大的应用价值,因为FLAG无论是处于蛋白分子中间或羧基末端,该抗体可识别相同的FLAG表位。M2对FLAG表位的识别不需要二价阳离子的存在,并且可以通过游离的多肽竞争性地将FLAG标记蛋白从M2分子中温和洗脱下来。
多种FLAG标记蛋白可保留全部的生化活性(如转录因子、生长因子和酶),这些标记物亦广泛应用于细胞染色、免疫印迹和免疫沉淀试验中。由于已有各种载体和检测试剂出售,包括抗体亲和树脂和直接标记抗体的商品,使其成为人们常选用的系统。
由于对抗-FLAG抗体的特异性进行了更详尽的研究,使得可以采用其他替代序列(Slootstraetal.1997)和更短部分(Knappik和 Pluckthunl994)作为标记物。抗-FLAG抗体产生的本底一般非常低,但M2抗体至少可与一种细胞蛋白发生交叉反应(Schafer和 Braunl995)。
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