蛋白-银染

使用说明：

1.固定:

电泳结束后，取凝股放入约100m1固定液中，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为60-70rpm。固定40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。

固定液的配制：依次加入S0ml乙醇、10ml乙酸和40ml Mili-Q级纯水或双蒸水，混今后即成100ml固定液。

2. 30%乙醇洗涤：

弃固定液，加入100m130%乙醇，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。

30%乙醇的配制：70ml Milli-Q级纯水或双蒸水中加入30ml乙醇，混匀后即成100ml 30%乙醇。

3.水洗涤：

弄30%乙醇，加入200ml Milli-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。如果本步骤用水洗涤更长时间，对降低染色的背景略有帮助。

4.増敏:

弃水，加入100ml银染增敏液(1x)，在摇床上室温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm。

银染增敏液(叉的配制：90ml Mili-Q级纯水或双蒸水中加入1ml银染增敏液(100x)，混匀后即为银染增敏液(1x)。银染增敏液（1x)配制后需在2小时内使用。

5.水洗涤(共2次)：

弃原有溶液，加入200ml Mili-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。

弃水，再加入200ml Mili-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。

6. 銀染：

弃水，加入100ml银溶液(1x)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。

银溶液(1x)的配制：99ml Milli-Q级纯水或双蒸水中加入1ml银溶液(100x)，混匀后即为银溶液(1x)。银溶液(1x)配制后需在2小时内使用。

7. 水洗：

弃原有溶液，加入100ml Milli-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1-1.5分钟，摇动速度为60-70rpm。

注意：水洗涤的时间不能超过1.5分钟。

8.显色：

奔水，加入100ml银染显色液，在摇床上室温摇动3-10分钟，真全出现比较理想的 预期蛋白条带，摇动速度为60-70rpm。

银染显色液的配制：80mL Milli-Q级纯水或双然水中加入20mL银染基本显色液(5X),再加入0.05nl银染显色加速液(2000x)。

混匀后即为银染显色液。银染显色液配制后需在20分钟内使用。

9，终止：

弃银染显色液，加入100ml银染终止液(X)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。终止时有气体产生属正常现象，产生的气体为二氧化碳。

银染终止液(X的配制：95ml Milli-Q级纯水或双蒸水中加入5ml银染终止液(20X),混匀后即为银染终止液(1X)。银染终止液(1X)配制后宜当天使用。

10. 水洗涤：

弃银染终止液，加入100ml Mili-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温据动2-5分钟，摇动速度为60-70rpm。

11.保存：

可在Mili-Q级纯水或双蒸水中保存。或采用适当的方式制备成干胶。